O surgimento de novas técnicas em biologia molecular tem alterado grandemente as formas de abordagens dos problemas básicos e aplicados nessa área. O desenvolvimento da técnica de amplificação de fragmentos de DNA, a reação em cadeia da polimerase (PCR), abriu enormes perspectivas em várias áreas do conhecimento. Em relação as principais técnicas resultantes de modificações da PCR, ASSOCIE corretamente as colunas a seguir: Coluna I a) Nested-PCR b) PCR em tempo real c) RT-PCR d) PCR multiplex e) PCR convencional Coluna II ( ) Na fase inicial, a presença da enzima transcriptase reversa converte o RNA em um DNA complementar (cDNA). Após a formação do cDNA, é continuada a PCR. ( ) À medida que o DNA é amplificado, o nível de fluorescência cresce proporcionalmente, pois, junto aos oligonucleotídeos (primers), são inseridas sondas marcadas que emitem sinal de fluorescência quando clivadas pela enzima exonuclease 5’- 3', assim que vai sendo finalizada a adição dos nucleotídeos. ( ) O produto utilizado para iniciar a amplificação é o de uma primeira PCR feita de forma tradicional. Além disso, adiciona-se um par de primers internos ao par utilizado na primeira reação, gerando um produto menor no final das duas etapas ( ) Para a amplificação são necessários oligonucleotídeos, pequenas sequências de nucleotídeos (primers), que irão se ligar na sequência de DNA alvo e fazer com que a enzima polimerase comece a adicionar os nucleotídeos complementares à fita da molécula. ( ) Em uma única reação, reproduz várias regiões diferentes do DNA ao mesmo tempo. Para isso, são adicionados, no mesmo recipiente, vários pares de primers específicos para cada sequência a ser identificada. ASSINALE a sequência correta: Alternativas Alternativa 1: A-B-C-D-E. Alternativa 2: A-C-D-B- E. Alternativa 3: B-C-E-D-A. Alternativa 4: C-B-A-E-D. Alternativa 5: D-E-A-B-C